Определение протромбина (фактора II) с использованием хромогенного субстрата

. -■ --■ -------- ......


Протромбин довольно накрепко определя­ется коагуляционным способом. Но опреде­ление протромбина с внедрением хромоген­ного субстрата относительно отлично стандарти­зовано. Не считая того, измерительный спектр значительно расширяется при скрининге пациен­тов с протромбиновой мутацией G20210A, при которой увеличен риск тромбоэмболии. Про­тромбин активизируется металлопротеазой экари-ном (фермент яда эфы Определение протромбина (фактора II) с использованием хромогенного субстрата многочешуйчатой) до ме-зотромбина - производное, которое не блокиру­ется гепарином и комплексом антитромбин-гепа­рин, но способно гидролизовать хромогенный субстрат (рис. 107) и свертывать не только лишь обык­новенный фибриноген, да и некие тромбин-резистентные его производные (РКМФ).

PIVKA-протромбин активизируется экарином, потому этот хромогенный тест может дать ложно-


завышенные результаты по Определение протромбина (фактора II) с использованием хромогенного субстрата активности протромби­на у пациентов, принимающих непрямые антикоа­гулянты либо страдающих недостатком витамина К. Примечание. PIVKA - Proteins Induced by Vita­min К Absence or Antagonists - протеины, синте­зируемые печенкой при отсутствии витамина К либо в присутствии его антагонистов (непрямых анти­коагулянтов). PIVKA не способны участвовать в процессе свертывания крови Определение протромбина (фактора II) с использованием хромогенного субстрата (см. раздел «Лечение антикоагулянтами непрямого действия».

Рис. 107. Принцип определения протромбинас исполь­зованием хромогенного субстрата


Определение фактора XIII


Исследование фактора XIII следует проводить в тех случаях, когда у хворого имеются проявле­ния кровоточивости, но при всем этом ПВ, АЧТВ и тес­ты на первичный гемостаз обычные. Посреди ори­ентировочных и Определение протромбина (фактора II) с использованием хромогенного субстрата скрининговых тестов на недоста­точность ф.ХIII может указать только тромбоэлас-тограмма, на другие испытания недостаток ф.ХIII практи­чески не оказывает влияние. В то же время недостаток ф.ХIII име­ет выраженные клинические проявления и может быть предпосылкой кровотечений неясной этиологии у человека на фоне полного здоровья, геморрагичес Определение протромбина (фактора II) с использованием хромогенного субстрата­кого синдрома при ДВС, гиперфибринолизе, после


удаления миндалин, при патологии печени и кост-но-мозгового кроветворения. Недостаток ф.ХIII мо­жет быть прирожденным и полученным, в том чис­ле в итоге возникновения аутоантител. Определе­ние недостатка ф.ХIII и его предпосылки нужно для предназначения адекватного исцеления, а именно ис­пользования концентратов фактора Определение протромбина (фактора II) с использованием хромогенного субстрата XIII. Для оп­ределения прирожденного недостатка ф.ХIII использу­ются иммунохимические способы, в том числе ELISA, применяется ПЦР-диагностика для геноти-пирования прирожденных мутаций. Но ф.ХIII -это высокополиморфный белок, определение его


Обеспечение диагностики нарушений гемостаза в КДЛ


структурных компонент нередко бывает недоста­точным, потому требуются многофункциональные тес Определение протромбина (фактора II) с использованием хромогенного субстрата­ты с определением активности ф.ХIII.

Фотометрический способ

Фактор XIII - фермент трансглютаминаза, которая образует поперечные сшивки меж пеп­тидами. При всем этом изопептидные связи образуют­ся меж остатками глютамина и лизина, в реак­ции освобождается аммиак. Последний опреде­ляется в ферментной реакции с глютаматдегид-рогеназой (ГлДГ) и α-кетоглютаратом, кофакто­ром реакции является Определение протромбина (фактора II) с использованием хромогенного субстрата НАДН, окисляющийся до НАД (рис. 108). Измерение проводится фотомет­рически при длине 340 нм, способ может выпол­няться на биохимических анализаторах.

Инкорпорирующий способ

Разработан новый способ определения фак­тора XIII, основанный на внедрении субстрата в


иммобилизированный белок, которое обеспечи­вается фактором ХIIIа. Ранее иммобилизо­вался казеин. В новеньком способе употребляется физиологический субстрат-фибрин Определение протромбина (фактора II) с использованием хромогенного субстрата. Фактор ХIIIа инкорпорирует субстрат 5-(биотинамидо)-пен-тиламин (БАПА) в фибрин, который определя­ется количественно с конъюгатом стрептави-дин-щелочная фосфатаза (рис. 109). Инкорпо­рирующий способ позволяет оценивать физиоло­гическую роль мутации Val34Leu фактора XIII, которая смешивается с риском внутричерепных кровоизлияний и кровотечений из внутренних органов. В то же Определение протромбина (фактора II) с использованием хромогенного субстрата время нездоровые с этой мутаци­ей фактора XIII фактически не мучаются ин­фарктом миокарда и венозными тромбозами. Мутацию Val34Leu фактора XIII не выявляет фотометрический способ. Инкорпорирующий способ может с фуррором употребляться для мо-ниторирования нездоровых с очень низким уров­нем ф.ХIII, что бывает при наследных де­фицитах.





Рис Определение протромбина (фактора II) с использованием хромогенного субстрата. 108. Принцип определения фактора XIIIфотометрическим способом

Рис. 109. Принцип определения фактора XIIIинкорпорирующим способом. БАПА - 5-(биотинамидо)-пентиламин, ЩФ-щелочная фосфатаза

Обеспечение диагностики нарушений гемостаза в КДЛ

Испытания для определения гепарина


Антикоагулянты прямого деяния обширно употребляются для профилактики и исцеления тром-боэмболической заболевания. Обычный тест АЧТВ полезен для контроля за исцелением гепари­ном, когда гепарин применяется в Определение протромбина (фактора II) с использованием хромогенного субстрата относительно низких концентрациях (описан выше). При вы­соких дозах гепарина, к примеру при операциях на открытом сердечко либо при диализе, АЧТВ не позволяет смотреть за эффектами гепарина. Анти-коагулянтное действие низкомолекулярного гепа­рина АЧТВ не улавливает.

Определение гепарина


opredelenie-stabilnosti-i-kachestva-pribili.html
opredelenie-staticheskih-uprugih-svojstv.html
opredelenie-stavki-diskontirovaniya.html